冷冻保藏
冷冻保藏是指将菌种于20℃以下的温度保藏，冷冻保藏为微生物菌种保藏非常有效的方法。 通过冷冻，使微生物代谢活动停止。一般而言，冷冻温度愈低，效果愈好。为了保藏的结果更加令人满意，通常在培养物中加入一定的冷冻保护剂；同时还要认真掌 握好冷冻速度和解冻速度。冷冻保藏的缺点是培养物运输较困难。
①普通冷冻保藏技术(-20℃)
将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面上，待生长适度后，将试管或瓶口用橡胶塞严格封好，于冰箱的冷藏室中储藏，或于温度范围在-20～5℃的普通冰箱中保存。或者将液体培养物或从琼脂斜面培养物收获的细胞分别接到试管或指管内，严格密封后，同上置于冰箱中存，
用此方法可以维持若干微牛物的活力1～2年。应注意的是经过一次解冻的菌株培养物不宜再用来保藏。这一万法虽简便易行，但不适宜多数微生物的长期保藏。
②超低温冷陈保藏技术
要求反期保藏的微生物菌种，一般都应在-60℃以下的超低温冷藏柜中进行保藏。超低温冷冻保藏的一般方法是：先离心收获对数生长小期至后期的微生物细胞，再 用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞，然后加入等体积的20％甘油或l0％二甲亚砚冷冻保护剂，混匀后分装入冷冻指管或安瓿中，于-70℃超低温冰箱中保 藏。超低温冰箱的冷冻速度一般控制在1～2℃／min。若干细菌和真菌菌种可通过此保藏方法保藏5年而活力不受影响。
③液氮冷冻保藏技术
液氮中保藏的菌种的存活率远比其他保藏方法高，而且回复突变的发生率极低。液氮保藏已成为工业微生物菌种保藏的最好方法。
具体方法是：把细胞悬浮于一定的分散剂中或是把在琼脂培养基上培养好的菌种直接进行液体冷冻，然后移至液氮(-196℃)或其蒸汽相中(-156℃)保藏；进行液氮冷冻保藏时府严格控制致冷速度。
在液氮冷冻保藏中，最常用的冷冻保护剂是二甲亚砜和甘油，一般甘油10％、二甲亚矾5％。甘油一般用高压蒸汽火菌，而二甲亚砜最好为过滤灭菌。
