1 称量和复水
按培养基处方准确称取各种成分，缓缓加入适量的水混合。为防止蛋白胨等粘附于瓶底，可以先在瓶中加入少量蒸馏水，再加入各种成分，然后再以剩余的水冲洗瓶壁。
2 溶解
适当加热，不停搅拌。含琼脂的培养基应在加热前先浸泡几分钟。由独立成分制成的培养基将不同成分分别加入适量的水中，并充分溶解，然后再加水至所需的量。
3 pH值调节
25℃时pH的变化不超过0.2个pH单位。用1mol/L的 NaOH 溶液或1mol/L的 HCl 溶液进行培养基pH的调整。
霉菌、酵母偏酸pH4.5～5.5，配制时须把pH值调高些。
细菌、放线菌中性或碱性。（自然即可）
微生物在生长中有可耐受的pH值范围，琼脂在pH<5以下有酸解现象，如不调ph固体培养基不凝固。酸性培养基应注意琼脂单独灭菌后加入，防止酸解。
